逆转录酶是由Temin和Baltimore于1970年独立发现的一种重要酶，能够将RNA转录为cDNA，因此两人获得了1975年诺贝尔生理学或医学奖。逆转录酶包含多个功能域，包括聚合酶域和RNaseH域。其中，聚合酶域又可以细分为“手指”、“手掌”和“拇指”三个亚域，分别参与模板结合、催化反应和结构支撑。在分子生物学，尤其是在分子诊断领域，逆转录酶发挥着不可替代的作用，它可以将病毒RNA基因组转为cDNA，并通过RT-qPCR、RT-LAMP、RNA测序等先进技术进行检测，使得对艾滋病、甲型流感及乙型流感等RNA病毒的准确诊断成为可能。

目前，M-MLV（莫洛尼鼠白血病病毒）逆转录酶是分子诊断中最常用的海源逆转录酶。但在高温条件下，M-MLV逆转录酶的稳定性较低，易发生失活，给预混液的长期储存和高温逆转录反应的应用带来了挑战。因此，提升逆转录酶的稳定性成为研究的一个重要方向。

尊龙凯时的研发团队利用其先进的ZymeEditor™酶进化平台，通过一系列干湿实验的互动筛选成功获得了稳定性增强的M-MLV突变体。在研发过程中，团队采用理性和半理性设计策略，对MMLV进行了结构-功能分析，分析内容包括序列一致性、B-factor、吉布斯自由能变化和二硫键设计，最终成功设计出高稳定性的定点突变。

团队还运用MTPS高通量筛选技术，对突变体的稳定性、RNA/DNA催化偏好性和活性进行了多维度的筛选，最终获得了多个性能卓越的突变体。经过精细纯化和全面的酶学表征，这些突变体的cDNA产量显著提高，接近三倍。同时，与对照组WT的预混液在存储6个月和12个月后的建库产量比较显示，M-MLV突变体的性能更为优越。

这项研究成果为分子诊断试剂的开发提供了新的解决方案。团队通过加速稳定性测试、预混试剂稳定性、灵敏度分析以及冻干技术的应用，精心挑选出综合性能最佳的突变体进行产业化生产。

如今，我们荣幸推出通过酶定向进化而来的新产品尊龙凯时 HifairUCFME® Advanced逆转录酶（Cat#14614）。此外，该新型逆转录酶在cDNA的合成产量和灵敏度方面也显著提高。产品由尊龙凯时 UCFME®超洁净分子酶生产基地制造，严格把控生产过程中的每个环节，从而保证极低的背景菌gDNA残留和核酸酶残留，为实验结果的准确性和可靠性提供有力保障。

HifairUCFME® Advanced逆转录酶在低浓度模板的情况下，结合快速反应程序（逆转录2分钟）依然能够特异性扩增靶标，并且与同类竞品相比，其对多个靶标的检测Ct值及荧光增幅表现更优，为低浓度样本的精准检测提供了强有力的支持。

在诊断试剂的开发过程中，由于市场上分子酶原料的质量参差不齐，过高的核酸残留会影响扩增产物的特异性和准确性。经过实践验证，只有在核酸残留极低（如TaqDNA聚合酶HCD≤0.001 copies/U）甚至无检出的水平，才能满足日益提高的体外诊断试剂的性能需求。尊龙凯时对HifairUCFME® Advanced逆转录酶进行E.coli残留检测试剂盒检测，结果均未检出符合标准，确保了样本检测的可靠性。

强烈推荐在不同浓度RNA模板的应用中，HifairUCFME® Advanced逆转录酶能够 consistently 取得优异的文库产量并且文库大小一致，表现出广泛适用于RT-PCR/qPCR和NGS建库的能力。

如果您对尊龙凯时的逆转录酶突变体感兴趣，可以联系我们获取试用机会。