尊龙凯时为您提供大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）的培养指南，帮助您在细胞养殖过程中获得最佳结果。以下是细胞培养的各项详细说明。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠成纤维样滑膜细胞FLS

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM+10%FBS+1%双抗

传代方法：建议首次传代比例为1:2，每两天更换培养基。请使用无菌离心管收集培养基以便进行对比培养，若对比效果不佳，建议直接选用尊龙凯时的完整培养基。

二、细胞处理和培养

在收到细胞后，建议将细胞培养至健康状态，再加入完整培养液并封好瓶口。对收到的细胞进行以下操作：

1. 用75%酒精喷洒消毒整个细胞瓶，确保操作在超净台内的无菌环境中进行。

2. 将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中，静置3-4小时以稳定细胞状态。

3. 使用显微镜观察细胞生长情况并拍照保存，建议使用40x、100x及200x放大倍率拍摄，每种倍率各一张，前三天的照片是售后考量的重要依据。

4. 传代时，一瓶使用原瓶培养基，另一瓶使用您自配的培养基以便对比，换液后请将瓶盖稍微松开。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，收集培养液至离心管，留5ml培养基于37℃、5%CO2培养；若细胞密度超过80%，进行细胞传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙镁PBS洗涤细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放置37℃培养箱消化1-2分钟，观察消化情况，若细胞变圆脱落，立即终止消化，加入5ml培养基。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落，吸出悬液，转至15ml离心管，在1000RPM下离心5分钟。
4. 弃去上清，重悬细胞于1-2ml培养基中，然后按1:2比例分瓶（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，放入37℃、5%CO2培养箱中。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长覆盖瓶面积80%时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞收缩后用5ml培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞脱落，转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
4. 弃上清后，沉淀细胞，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
5. 将冻存细胞放入-80℃冰箱保存，如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中保存24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，快速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞转移至含5ml培养基的15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml培养基重悬后接种至T25培养瓶，在37℃、5%CO2培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，某些细胞可能会脱落，属于正常现象。如观察到较多细胞脱落，可采取以下措施：

1. 将培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养。
2. 沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml培养基终止消化。
3. 再离心、弃上清后，重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 按1:2比例分瓶传代，补充新培养基至5-8ml/瓶，重新放入37℃、5%CO2培养箱中。

五、售后条款

关于细胞出现问题的处理及重发标准：

1. 细胞在运输过程中丢失、瓶身破损、培养液漏出等情况，将进行重发。
2. 收到产品48小时内若发现污染，请提供实验结果以便核实，合格后将进行重发。
3. 常温发货的细胞如静置24小时，干冰发货的细胞复苏后24小时内生存率不佳均可重发，需提供真实细胞状态照片。
4. 若细胞状态良好在收到3天内未反馈，则视为产品合格。
5. 需遵循根据实际情况进行的其他进一步判定。

请牢记使用尊龙凯时的产品及指导，持续关注细胞养殖质量，为您的研究成果保驾护航。